JIMT-1人乳腺癌細(xì)胞

細(xì)胞名稱：JIMT-1人乳腺癌細(xì)胞

種屬來(lái)源：人

性別年齡：女性，62歲

組織來(lái)源：乳腺

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞規(guī)格：1 X 10⁶cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件：DMEM + 10% fetal bovine serum (FBS)+1%P/S

         37 ℃, 5% CO2

凍存條件：90% FBS + 10% DMSO

傳代方法：1:2-1:6傳代, 2-3天傳1代

細(xì)胞培養(yǎng)操作

干冰運(yùn)輸：收到細(xì)胞后需立即轉(zhuǎn)入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復(fù)蘇

常溫運(yùn)輸：收到細(xì)胞后，請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代

細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80% - 90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟

對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞的脫落。

1. 收到細(xì)胞后，請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因?yàn)檫\(yùn)輸過(guò)程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請(qǐng)勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中多余的培養(yǎng)基，至剩余5-8mL 左右，隨后根據(jù)培養(yǎng)基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶，請(qǐng)立即傳代。

3. 對(duì)于懸浮的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管，150 g 離心 5 分鐘，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存管細(xì)胞操作步驟

注意： 為保證細(xì)胞的高活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1. 將凍存管置于37℃水浴中來(lái)回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約1分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3. 將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mLwan全培養(yǎng)基的離心管中，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。

4. 用wan全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。

5. 將細(xì)胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS潤(rùn)洗一次。

2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過(guò)程大約需要3-5分鐘。

3. 加入2mL全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。

4. 將細(xì)胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

懸浮細(xì)胞傳代可參考以下方法：

一、直接傳代法

1. 待懸浮細(xì)胞長(zhǎng)滿至 80%～90%（細(xì)胞懸液變黃），即可傳代；

2. 用吸管吸棄細(xì)胞懸液 1 / 2~1 / 3；

3. 加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

   二、離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞碎片的情況下）

4. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；

5. 150 g 離心 5 min，棄去上層清液；

6. 使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

7. 吸管吸取適量細(xì)胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存操作

1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)；

2. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。

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